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          Calcein釋放實驗檢測細胞毒性T淋巴細胞活性實驗方法
          
                
          
                  發(fā)布時間： 2021-11-12　　點擊次數(shù)： 1838次  
                
          
                
          
                 
          實驗步驟

          1． 靶細胞的標記　
          用5μmol/L Calcein AM 37℃ 水浴30min進行標記。
           
          2． 效-靶細胞作用　
          殺傷實驗在圓底96孔培養(yǎng)板中進行。按E/T比例：50/1、25/1、12.5/1、6.25/1、3.13/1、1.56/1加入梯度稀釋的效應細胞與標記好的靶細胞各l00μl/孔，每個比例3復孔。同時設自發(fā)釋放組3復孔，*釋放組3復孔。效-靶細胞作用96孔培養(yǎng)板在37℃ 5％ CO2培養(yǎng)箱孵育4h后，3000r/min離心5min，將上清移入新的孔中。
           
          3． 熒光檢測　
          用熒光測量儀檢測上清的熒光值(FI)，激發(fā)光為485nm，發(fā)射光為538nm。
           
          4． 結果計算
          殺傷率(％)=■×100%


          
                
          
                
            
          
        
          
     
          
     
          
   
          
 
          
 
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