美女操逼网站,欧美日韩国产精品一区色欲,大鸡巴狂操美女裸体,欧美图片国产综合

      <pre id="rnsxh"><label id="rnsxh"><th id="rnsxh"></th></label></pre>
      

        <p id="rnsxh"><pre id="rnsxh"></pre></p>
        

        
    
        
      
        
        
        
            
            
        
                
        銷售熱線
        
                19126518388
            
        
        
        
      
        
      
        
      
             
         
    
         
         

  
  
  
        
    
        
	  
        
        
        
        
 
        
     
   
 
         
         
        
	   
        
    
        
  
        
      

        
  
        
    
          
      
        • 
        
          
        
          
            
          技術文章ARTICLE
          
            
          您當前的位置：首頁 > 技術文章 > 原代小鼠心肌成纖維細胞分離培養(yǎng)方法
          
          
          
          
        
          

          
          
          
            
          
                
          原代小鼠心肌成纖維細胞分離培養(yǎng)方法
          
                
          
                  發(fā)布時間： 2022-10-25　　點擊次數： 1540次  
                
          
                
          
                 
          小鼠心肌成纖維細胞的組織來源于實驗動物的正常心臟組織，心臟是脊椎動物身體中最重要的一個器官，主要功能是提供壓力，把血液運行至身體各個部分。

          心臟的作用是推動血液流動，向器官、組織提供充足的血流量，以供應氧和各種營養(yǎng)物質，并帶走代謝的終產物（如二氧化碳、無機鹽、尿素和尿酸等），使細胞維持正常的代謝和功能。
          心臟中，心肌成纖維細胞約占正常心肌組織細胞總數的60%-70%，是心臟中非心肌細胞的主要組成部分，廣泛存在于心臟組織中，包圍心肌細胞，連接心肌細胞間質，與缺血性心臟病、炎癥、肥大、梗死等病理狀態(tài)密切相關。細胞生長方式以長梭狀細胞，貼壁培養(yǎng)。
          小鼠心肌成纖維細胞的方法有很多，賽百慷提供的心肌成纖維細胞分離方法有兩種，一種是貼塊法，一種是消化法，這兩種方法都可以用于分離和培養(yǎng)原代細胞。




          實驗器械
          1.培養(yǎng)皿
          2.T-25細胞培養(yǎng)瓶
          3.100目不銹鋼網篩
          4.200目不銹鋼網篩
          5.眼科剪
          6.眼科鑷
          7.離心管（15ml、50ml）

          實驗分離和培養(yǎng)步驟
          1. 小鼠頸椎脫臼處死后，剃除腹胸部的被毛，放入裝有75%酒精的燒杯中浸泡5min。


          2. 取出小鼠，在無菌環(huán)境下打開胸腔，取出心臟組織，注入盛有無菌1×PBS的培養(yǎng)皿中，洗凈組織表面的血液。
          3. 將清洗干凈的心臟組織轉入裝有75%酒精的培養(yǎng)皿中浸泡15s以殺死大多數的心臟被膜細胞，浸泡完成后立即轉入裝有無菌1×PBS的培養(yǎng)皿中震蕩清洗。
          4. 清洗完成后，用剪刀鑷子配合除去主動脈弓和心房組織，僅保留心室部分，再次用1×PBS清洗去除心室內的血液。
          5. 將清洗干凈的心室組織用剪刀減成1mm3大小左右的碎塊，之后用PBS清洗若干次后按下述兩種方法之一進行后續(xù)操作。     
           
          A.貼塊法


          6. 將清洗好的碎塊轉入另一培養(yǎng)皿中，用0.25%胰蛋白酶消化液浸泡組織，室溫消化3-5min。
          7. 消化完成后，添加數毫升FBS終止消化，之后吸棄液體，加PBS清洗組織塊1次后，用200ul吸頭將組織塊平均接種于T-25培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)面上，之后將培養(yǎng)瓶放置于37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中，靜置2-4h。
          8. 待組織處于略微脫水的狀態(tài)時，小心添加2ml完培養(yǎng)基，添加時注意盡量不要將組織塊沖起，要使培養(yǎng)基接觸所有的組織塊。
          9. 之后放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，一般2-4天后成纖維細胞會從組織塊周圍爬出，待爬出的細胞有較多數量時，可將細胞消化下來，去除組織塊，轉入另一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
           
          B.消化法
          6. 將清洗好的碎塊轉入另一離心管中，加入混合消化液（0.08%胰酶+0.06%Ⅱ型膠原酶）37℃水浴消化8min后，吸取上層混懸液棄去。
          7. 余下組織加入混合消化液10ml，37℃水浴震蕩消化10min；吸取上層懸液至另一離心管中，加入適量FBS終止反應；剩余沉淀物再加消化液消化3-5次，直至組織塊消化。
          8. 按1∶1加入含血清的培養(yǎng)基，中止酶反應，懸液過150目網篩去除較大的組織塊。
          9. 收集全部中止后的消化液于離心管中，300g，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸細胞后計活細胞數。
          10. 調整細胞密度以1× 106個/ml 接種入的T-25培養(yǎng)瓶中，每瓶添加2ml細胞懸液。
          11. 培養(yǎng)瓶放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中靜置40min后，吸棄上清液以去除未貼壁的非成纖維細胞和死細胞，再添加5ml完培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。


          以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。
           
          安培生物科技有限公司介紹：
          安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規(guī)模生物生產、基因和細胞治療領域客戶，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產，包括培養(yǎng)間充質干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產服務；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質膠產品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領域提供優(yōu)質的產品和技術服務，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)

          
                
          
                
            
          
        
          
     
          
     
          
   
          
 
          
 
          • 

        

  
        
    
        
	  
        
	    
        
        
        
          產品中心
          Products